وكتور نوتركيب pET-28a/ɲiC به واسطه داشتن پروموتر باكتريوفاژ T7 يك پلاسماي بياني است كه مي تواند در ميزبان مناسب خود مثل (DE3)وBL-21 و E.coli بيان گردد. براي اين منظور ابتدا ميزان بياني با كلريد كلسيم (CaCl2) مستعد (Competence) گرديد و سپس وكتور نوتركيب به درون اين ميزبان به روش شوك حرارتي ترانسفرم شد. كلوني هاي رشد كرده در محيط LB آگار حاوي كانامايسين (Kanamycin) براي تأييد حضور پلاسميدهاي نوتركيب غربالگري شدند. غربال هاي مذكور در حجم وسيعي از محيط LB broth حاي كانامايسين (حدود 400-300 ميلي ليتر) كشت داده شدند. براي القاء پروموتور وكتور نوتركيب PET-28a/ɲiC ، از IPTG (آنالوگ سنتتيك آلولاكتوز) استفاده شد. سپس از سانتريفيوژ كردن جهت Harvest كردن سلول ها استفاده شد. براي شكستن باكتري از روش ليز آنزيماتيك و ليز مكانيكي استفاده شد، بدين ترتيب كه رسوب (Pellet) باكتريايي حاصل از سانتريفيوژ در 0.2mg/ml Lysozymeو 20µg/ml DNaseو 1mM PMSFو 1mM MgCl2 حل گرديد. عمل انحلال اين تركيبات با رسوب باكتري به روش سونيكاسيون (Sonication) بر روي يخ انجام شد. لازم به ذكر است كه از روش فريز كردن - گرما دادن (freezing/thawing) نيز جهت شكستن باكتري ها استفاده شد. از روش كروماتوگرافي نيكل (Chromatography Ni) جهت تخليص پروتئين استفاده شد. بدين ترتيب كه ابتدا پروتئين هاي نوتركيب حاي هيستيدين (Histidine-tagged) كه به شكل اينكلوژن درآمده اند، بايستي حل شوند (Solubilized) كه با استفاده از 6M Guanidine - HCl يا 8M Urea اين امر محقق شد. براي اين منظور از Dcnaturing Binding Buffer استفاده شد. شستشوي اين مرحله نيز با Denaturing Wash Buffer صورت گرفت. براي اينكه پروتئين هاي حل شده عملكردشان را بازيابند، نياز به مرحله اي تحت عنوان Refolding مي باشد كه از گرادينت ايميدازول (Imidazole) براي تحقق اين امر استفاده شد. براي اين كار از بافرهاي Native Binding Bufferو Nativc Wash Buffer و Native Elusion Buffer استفاده گرديد. خلوص پروتئين تخليص شده از روش فوق، به روش SDS-PaGF و رنگ آميزي كوماسي بلو G-250 ارزيابي شد (شكل 1). در نهايت محصول كروماتوگرافي در بافر PBSو (pH:4.4) دياليز گرديد و مقدار پروتئين توليد شده از تكيك وسترن بلاتينگ (Western blotting) با استفاده از انتي بادي ضد فلاژلين نوتركيب استفاده شد (شكل 2).